总理候选人兰塞、记者提莎、电影明星卡普尔和赌场主汉曼隆各收到一封信,信的内容不尽相同,但目的都是引诱他们前往希腊的萨摩斯岛。出于对利益和真相的好奇,4个身份截然不同的人同时踏足萨摩斯岛。岛主富豪马赫会见了他们,并道出失散多年的女儿玛雅的悲惨故事,应邀而来的4个人均和玛雅的死有着密切关系,究竟这是一场精心策划的陷阱,还是一场鹿死谁手的“游戏”?。传说用耶稣在最后的晚餐中用到的圣杯喝水,便能长生不老。在一次掘金活动中,记载圣杯的碑石被发现,圣杯存在的可能吸引着大批的疯狂的人展开寻找。印第安纳琼斯博士也是他们中的一员,甚至连他的父亲老琼斯也陷入其中——但他给琼斯留下圣杯的笔记后便不知所踪。
踏上威尼斯的土地,琼斯和事先约好的史奈达博士会面,他们在图书馆里凭线索找到圣盾后,却开始遭到莫名的来自十字剑兄弟的追杀。
一番波折后,琼斯终于找到了老琼斯,同时,史奈达的纳粹身份暴露,笔记被抢走。圣杯随时都有可能落入纳粹的手中。
于是,琼斯父子俩开始联袂上演拯救圣杯的精彩大戏!。